Microscopio electronico mixto

PARTE 1 :CUESTIONARIO

1.Diferencias entre el microoscopio óptico y electrónico

Un microscopio óptico es un microscopio basado en lentes ópticas. El desarrollo de este aparato suele asociarse con los trabajos de Anton van Leeuwenhoek. Los microscopios de Leeuwenhoek constaban de una única lente pequeña y convexa, montada sobre una plancha, con un mecanismo para sujetar el material que se iba a examinar (la muestra o espécimen). Este uso de una única lente convexa se conoce como microscopio simple, en el que se incluye la lupa, entre otros aparatos ópticos. 

Un microscopio electrónico es un microscopio que utiliza electrones en vez de fotones o luz visible para formar imágenes de objetos diminutos. Los microscopios electrónicos permiten alcanzar una capacidad de aumento muy superior a los microscopios convencionales (hasta 500.000 aumentos comparados con los 1000 aumentos de los mejores microscopios ópticos) debido a que la longitud de onda de los electrones es mucho menor que la de los fotones.

2. Tipos de microscopios y sus aplicaciones

•Microscopio Compuesto:

Se utiliza para aumentar las imágenes de objetos que no son visibles a simple vista. Su método de iluminación es luz visible y por lo tanto el aumento es limitado; además que también se usa para ver objetos transparentes o cortados en láminas muy finas que la luz puede pasar a través de ellos

•Microscopio estereoscópico

Hace posible la visión tridimensional de los objetos, y para lograrlo utiliza dos oculares (los que están cerca del ojo) y dos objetivos (los que se encuentran cerca de la muestra). Se utiliza para objetos relativamente grandes, por lo que requiere pequeños aumentos, generalmente de 4X y 40X a 60X.

•Microscopio de campo oscuro:

En este microscopio los rayos de luz se ilumina de forma oblicua, de esta forma el objeto iluminado dispersa la luz y se hace visible contra el fondo oscuro. Se utiliza para analizar elementos biológicos transparentes y sin pigmentar, imposibles de ver con luz natural.

•Microscopio de fluorescencia:

el objeto es iluminado con rayos de una determinada longitud de onda, las moléculas la absorben y remiten luz con una longitud de onda mayor.Su fuente de iluminación es una lámpara de mercurio o halógeno que emite la mayor cantidad de luz UV en el límite del espectro visible, sus objetivos son generalmente de cuarzo y los filtros retienen la radiación ultra violeta peligrosa para el ojo.

Ya que las moléculas con la propiedad de fluorescencia son escasas, este microscopio se utiliza también  para revelar fluorescencia agregada como en la detección de antígenos o anticuerpos, o cuando se inyectan moléculas fluorescentes en células para utilizarlas como marcadores.

•Microscopio de contraste de fases:

permite observar células sin colorear, por lo que es muy útil para células vivas, ya que como bien sabemos el fijarlas y teñirlas implica la muerte de la misma, lo que además puede dañar o cambiar la estructura.Su fundamento se basa en el retraso que se produce en las ondas de luz al atravesar objetos de distintos índices de refracción, aprovechando y amplificando dichos retrasos

•microscopio invertido tiene una disposición inversa en sus componentes respecto a un microscopio convencional. La luz y el condensador están mirando hacia abajo y se encuentran en la plataforma, y los objetivos están debajo apuntando hacia arriba. Este equipo permite observar organismos o tejidos en cultivo sin una preparación previa,

Mecionados fanyo :

• Microscopio electrónico de barrido.
• Microscopio óptico
• Microscopio simple
• Microscopio compuesto
• Microscopio de luz ultravioleta
• Microscopio de fluorescencia
• Microscopio petrográfico
• Microscopio de campo oscuro
• Microscopio de contraste de fases
• Microscopio de luz polarizada
• Microscopio confocal
• Microscopio electrónico
• Microscopio electrónico de transmisión
• Microscopio electrónico de barrido
• Microscopio de iones en campo
• Microscopio de sonda de barrido
• Microscopio de efecto túnel
• Microscopio de fuerza atómica
• Microscopio virtual

3. ¿Que es un microorganismo?

Los microorganismos son formas de vida muy pequeñas que sólo pueden ser observados a través del microscopio. En este grupo están incluídas las bacterias, los virus, los mohos y las levaduras. Algunos microorganismos pueden causar el deterioro de los alimentos entre los cuales se encuentran los microorganismos patógenos, que a su vez pueden ocasionar enfermedades debido al consumo de alimentos contaminados. Sin embargo, por otro lado existen también algunos microorganismos que son beneficiosos y que pueden ser usados en el procesamiento de los alimentos con la finalidad de prolongar su tiempo de vida. Su importancia radica en que han dado origen a una rama de la biología dedicada a su estudio: microbiología.

4.¿Qué es un colorante y que tipo de colorantes hay ?

Para la observación microscópica existen diferentes tipos de coloraciones según las(s) características morfológicas que quieran ponerse de manifiesto. Se clasifican en simples y compuestas

COLORACIONES SIMPLES:

Se entiende por coloración simple al teñido de los microorganismos aplicando sólo una solución colorante.

Pueden ser positivas o negativas

a) La coloración positiva es la tinción de los microorganismos, efectuada con  colorantes básicos que, como ya dijimos, poseen afinidad por los constituyentes celulares y se combinan químicamente con el citoplasma microbiano.

•Técnica:

Se cubre el frotis, después de fijado, con la solución colorante y se deja actuar el  tiempo preciso. Luego se lava con agua y se deja secar.

•Con fucsina básica:

se diluye 1/10 la solución de uso (fucsina fenicada de Ziehl) y se deja actuar 30 a 60 segundos.

•Con violeta de genciana:

se diluye al 1/10 la solución de uso y se deja actuar 30 a 60 segundos.

•Con azul de metileno:

se cubre el preparado con la solución de uso (azul de metileno alcalino de Loeffler) sin diluir y se deja actuar 3 a 5 minutos.

—- >El azul de metileno es el colorante más débil de los tres, razón por la cual se usa más concentrado y se deja actuar durante más tiempo.

También a la solución de azul de metileno de uso se le agrega un álcali (KOH) como intensificante, que actúa haciendo más rápida e intensa la reacción de coloración.

B)La coloración negativa:

Es  lo contrario del procedimiento de tinción usual: los  microorganismos quedan sin teñir y se colorea el medio que los rodea. Por lo tanto, lo que se ve es el perfil de las células.

La sustancia usada para la tinción negativa es un colorante opaco que no tiene afinidad por los constituyentes celulares y que simplemente rodea a las células, tal como:

•Tinta china (suspensión de partículas de Carbono coloidal  demasiado grandes como para penetrar en la bacteria)

•Colorantes ácidos (no poseen afinidad por los constituyentes celulares). El más utilizado es la nigrosina dado que es el que más contraste ofrece por ser negro.

—- >La coloración negativa es un modo satisfactorio de aumentar el contraste de los microorganismos en microscopía óptica, pero su máxima utilidad está en revelar estructuras como cápsulas tanto bacterianas como de levaduras, esporas que se observan como cuerpos refringentes y espiroquetas que, por su pequeño diámetro transversal, resulta difícil ponerlas en evidencia; por medio de la coloración negativa se observan sin dificultad.

Método de Burri (con tinta china o nigrosina):

Se coloca en un extremo del portaobjetos una gota de tinta china o nigrosina y otra de lasuspensión microbiana y se mezclan bien con el ansa. Luego, con otro porta se apoyasobre la mezcla y se hace un extendido a lo largo del porta. Con este procedimiento elespesor del frotis va disminuyendo a medida que se extiende, con lo cual se conseguiráuna zona donde el contraste sea el adecuado. Se deja secar bien y se observa con elobjetivo de inmersión.

COLORACIONES COMPUESTAS

Aunque existen múltiples tipos de tinciones, vamos a referirnos aquí a los dos métodos de coloración especiales más comunmente empleados en la práctica corriente del laboratorio de microbiología: la tinción de Gram y la de Ziehl-Neelsen.

A)Tinción de Gram

Elaborada por Hans Christian Gram en 1884, es la más empleada en bacteriología. Permite diferenciar las bacterias incluso cuando tienen igual forma y tamaño, por esta razón es una “tinción diferencial”. Aunque no totalmente aclarada, la propiedad de la gram positividad depende de la naturaleza y composición química de la pared o parte de ella. Se han propuesto varias teorías para su explicación, pero la más aceptada es la que sostiene que las bacterias gram negativas son más permeables al alcohol debido a su alto contenido en lípidos.

Cuando la bacteria se tiñe con el complejo colorante básico-mordiente, éste queda atrapado en las bacterias gram positivas y no puede ser arrastrado por el decolorante a causa de la naturaleza físico-química de su pared

B)Tinción de Ziehl-Neelsen

se basa en la propiedad de la ácido-alcohol resistencia de algunas bacterias del orden Actinomycetales, si bien no es privativa de ellas.

Estos microorganismos se consideran gram positivos, pero se colorean difícil e irregularmente, de ahí que emplee este tipo de tinción (Ziehl- Neelsen) o su variante (Kinyoun). Cualquiera de las dos técnicas citadas consiguen, ya sea por el calor o aumentando el tiempo de contacto, que la fucsina penetre profundamente y pueda resistir la acción decolorante de una solución de ácido-alcohol, apareciendo los bacilos de color rojo sobre un fondo azul

5.¿Qué función cumple el aceite de inmersión?

La función del aceite de inmersión es restringir el movimiento de la muestra, además de evitar el rozamiento entre el cubre objetos y el objetivo, generalmente se lo utiliza cuando vamos a observar con el objetivo 100x. Otra función del aceite de inmersión es evitar que la luz se desvíe; al contrario lo que se pretende es que la luz llegue concentrada hacia la muestra